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激光共聚焦顯微鏡的樣品制備原則介紹

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2023-11-27 14:31:19【

激光共聚焦電子顯微鏡檢測前的關(guān)鍵技術(shù)步驟就是進行樣品制備。樣品需要用不同的單,雙和三類的熒光探針標記。標本可以是固定的或活著的組織或附著培養(yǎng)物。細胞應培養(yǎng)在共聚焦特殊碟或蓋,懸浮細胞,萼片或滴,并蓋玻片。

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樣品的Z大不同厚度約1~2mm,蓋玻片厚度應小于0.17mm,滑塊厚度一般應在0.8~1.2mm之間,表面要光滑,厚度要均勻,沒有一個明顯的干擾熒光。固定標準樣品通常用密封片密封,通常需要使用企業(yè)通過研究使用pH 8.5-9的PBS制備的甘油密封。

常規(guī)樣品制備要求

⒈染料的選擇

由于激光共聚焦顯微鏡采用單波長激光作為光源,熒光染料的選擇應以激光共聚焦顯微鏡的激光波長為基礎。 如果同一樣品中有多個熒光染料,盡可能考慮它們的發(fā)射波長。 不要重疊,避免交叉顏色問題。

⒉樣品載體的選擇

一般的激光共焦顯微鏡高倍物鏡是一種油鏡。其數(shù)值不同孔徑小,鏡片與樣品數(shù)據(jù)之間的工作時間距離不大于0.17mm。因此,如果觀察分析樣品是粘附細胞或組織網(wǎng)絡切片,則可以使用一個普通用戶負荷,滑蓋玻璃就可以了。對于懸浮的細胞或顆粒,可以通過在激光共聚焦顯微鏡的培養(yǎng)皿中攜帶樣本來觀察。

⒊密封片的選擇

如果僅需要進行觀察分析樣品一次并且我們不太容易淬滅熒光,則可以使用具有一定濃度的甘油混合物來密封膜。如果一個樣品需要放置一段發(fā)展時間并且樣品需要經(jīng)過多次使用,則應使用抗熒光淬火密封來減少熒光信號損失。

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